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細胞培養

細胞培養

一、項目介紹

  細胞 (cell)是生物體基本的結構和功能單位,已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成,因此,對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關鍵。以細胞為研究對象,從細胞的整體水平、亞顯微水平、分子水平等三個層次,研究細胞和細胞器的結構和功能、細胞的生活史和各種生命活動規律頗具意義。

二、樣品保存運輸(寄送細胞時請下載資料中心樣品寄送信息單《細胞送樣單》并填寫好發送給平臺助理)

  1、活細胞運輸方法

  請用如圖所示不透氣培養瓶培養細胞, 待細胞匯合度達到70% 左右時,灌滿新鮮培養基至接近瓶口處,擰緊瓶蓋,封口膜進一步封住瓶口。瓶身上做好標記(細胞名稱,培養基,日期等)。打包時必需做防震處理。常溫寄送。

  2、凍存細胞運輸方法

  一定要保證干冰充足(2-3天寄送時間,8-10kg干冰較充足),凍存管確保被干冰完全覆蓋。切勿凍融。勿將水冰混入干冰件中。

  3、流式樣本接收注意事項

  ①細胞凋亡

  需要活細胞(外地樣本不接)。如果細胞帶熒光,一定要在交接單和培養板上備注,否則按照無熒光處理。如果因此導致檢測結果不可用及樣本浪費,我方概不負責,也不接受退單。

  ②細胞周期

  周期需要細胞量比較多,6 孔板送樣要求匯合度在70%以上,但不能超過90%。外地樣品,需用預冷的70% 乙醇固定過夜后(貼壁細胞需要消化后進行固定),離心棄固定液,加1ml PBS重懸,封口膜封好,4℃運輸寄到實驗室。

  ③流式JC-1

  需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個空白孔,做陰性和陽性對照。如果細胞帶紅光或綠光,不能檢測。

  ④流式ROS

  需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個空白孔,做陰性和陽性對照。如果細胞帶綠光,不能檢測。

  ⑤細胞表抗

  提前確定公司是否有相應流式抗體(組化抗體不可用),其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。

  ⑥流式三標

  提前告知樣本具體數量和類型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內染色至少需要1.5 mL,表抗需要約1 ml),注意防止凝血,4℃保存運輸。血樣4℃保存最多只能存放一周,時間越久實驗結果越差。取血后,需盡快寄到實驗室;取脾臟時盡量將動物帶到實驗室,直接在實驗室取材后開始實驗,若不能將動物帶到實驗室,取材(整個脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中,4℃保存,提細胞必須在取材后6 小時以內完成,注意有些檢測指標(Treg,TH1, TH2 等)需無菌提取。外地樣本不接。

  4、質粒、RNA類、病毒類

  質粒載體、miRNA、siRNA等-20℃寄送。

  慢病毒:-80℃保存、 充足純干冰寄送。

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